Trometamolo biologico dell'amplificatore della base 77-86-1 di Tris

Tris Base 77-86-1 tampone biologico trometamolo

Utilizzazioni del tampone Tris nell'elettroforesi delle proteine e nella Western Blotting

I tamponi Tris sono parte integrante dell'elettroforesi proteica e della Western Blot.Tutti i tamponi comuni sono disponibili premixati, o, se preferisci fare il tuo tampone Tris, puoi iniziare con polvere Tris purificata, glicina e altri reagenti tampone di biologia molecolare.

La maggior parte dei gel SDS utilizza un sistema tampone Tris discontinuo.8A questo pH, gli ioni cloruro ionizzati migrano rapidamente, aumentando il pH dietro di loro e creando un gradiente di tensione con una zona di bassa conduttività,che fa sì che la glicina (dal buffer in corso) si ionizzi e migri dietro il fronte dei cloruriLa maggior parte dei peptidi presenti nel campione, che hanno una carica negativa a causa della SDS legata, migrano tra il cloruro e la glicina, formando una banda stretta e diventando così "accumulati".

Una volta che la pila raggiunge il gel di risoluzione, che è ad un pH più elevato (tipicamente pH 8,7 – 8,8), l'aumento dell'ionizzazione della glicina fa accelerare e superare i peptidi.la dimensione più piccola dei pori del gel di risoluzione inizia ad avere un effetto setacciamento, con conseguente separazione dei peptidi per dimensioni.

La maggior parte dei protocolli di blotting occidentali utilizza un tampone Tris di bassa forza ionica per il trasferimento di proteine.

Utilizzo del tampone Tris nell'elettrforesi dell'agarosio dell'acido nucleico

I tamponi Tris sono ampiamente utilizzati per l'elettroforesi dell'agarosio del DNA. I due tamponi principali sono TBE (Tris borato / EDTA) e TAE (Tris acetato / EDTA).Anche se ci sono alcune differenze nella risoluzione delle diverse forme di DNA e nella loro mobilità durante l'elettroforesiGli ioni boratici in TBE inibiscono molti enzimi, quindi senza eseguire qualche tipo di purificazione del DNA dopo l'elettroforesi,alcune manipolazioni a valle mediate da enzimi potrebbero non funzionarePertanto, il tampone TAE è preferito per l'uso quotidiano nella maggior parte dei laboratori di DNA.

Come creare un buffer per Tris

Il tampone Tris è una buona scelta per la maggior parte dei sistemi biologici perché ha un pKa di circa 8,1 a 25°C, rendendolo un tampone efficace nell'intervallo pH 7 ̊9.Questo intervallo di pH è adatto alla maggior parte dei processi biologiciLa polvere di Tris è anche meno costosa e più robusta rispetto a tamponi più specializzati come l'HEPES.

Esistono due modi per produrre una soluzione tampone Tris. Uno è produrre soluzioni di Tris base e Tris HCl, entrambe alla concentrazione desiderata,e quindi aggiungere aliquoti di una soluzione (di solito Tris HCl) all'altra soluzione (di solito Tris base) monitorando il pH fino a ottenere il pH correttoIn pratica, questo viene fatto molto raramente.

Il metodo usuale per produrre la maggior parte dei tamponi Tris comunemente utilizzati è quello di iniziare con solo la base Tris.e poi il buffer è fatto fino al volume desideratoSupponendo che non si verifichi un eccesso durante l'adeguamento del pH, questo metodo non modifica la forza ionica.o utilizzando Tris HCl e regolando il pH con NaOHA seconda dell'uso previsto del tampone Tris, tale cambiamento può o meno essere importante.

Quando si realizza un tampone Tris, è importante utilizzare un elettrodo compatibile con Tris per regolare il pH.Gli elettrodi Ag/AgCl a giunzione singola possono mostrare instabilità quando vengono utilizzati con tamponi Tris perché l'argento precipita gradualmente e ostruisce l'elettrodoL'impiego di elettrodi di riferimento a doppia giunzione o calomel garantisce misure precise del pH nel tampone Tris.