Trometamolo biologico dell'amplificatore della base 77-86-1 di Tris

Trometamolo biologico dell'amplificatore della base 77-86-1 di Tris

Usi dell'amplificatore di Tris nell'elettroforesi della proteina e nel macchiare occidentale

Gli amplificatori di Tris sono integrali all'elettroforesi della proteina ed a macchiare occidentale. La maggior parte dei gel di SDS-PAGE, eseguire gli amplificatori e macchianti gli amplificatori sono attenuati con Tris. Tutti gli amplificatori comuni sono premescolato disponibile, o, se preferite fare il vostro proprio amplificatore di Tris, potete cominciare con la polvere purificata di Tris, la glicina ed altri reagenti dell'amplificatore del grado di biologia molecolare.

La maggior parte dei gel di SDS utilizzano un sistema tampone discontinuo di Tris. Il gel d'impilamento, che ha grandi pori in moda da potere migrare facilmente i più grandi peptidi da parte a parte, è formulato solitamente a pH 6.7-6.8. A questo pH, gli ioni ionizzati del cloruro migrano rapidamente, sollevando il pH dietro loro e creando una pendenza di tensione con una zona della conducibilità bassa, che induce la glicina (dall'amplificatore corrente) a ionizzare e migrare dietro la parte anteriore del cloruro. La maggior parte dei peptidi nel campione, che hanno una carica negativa dovuto il limite SDS, migrano fra il cloruro e la glicina, formanti una banda stretta e stanti così «impilati».

Una volta che la pila raggiunge il gel di risoluzione, che è ad un più a pH elevato (tipicamente pH 8.7-8.8), la ionizzazione aumentata della glicina la induce ad accelerare e sorpassare i peptidi. Ulteriormente, la più piccola dimensione del poro del gel di risoluzione comincia avere un effetto di setacciamento, con conseguente separazione di peptidi dalla dimensione.

La maggior parte dei protocolli macchianti occidentali usano un amplificatore di Tris di forza ionica bassa per il trasferimento della proteina. Il tempo di trasferimento dipende dal tipo di apparato macchiante e dall'intervallo di grandezza del peptide di interesse.

Uso dell'amplificatore di Tris nell'elettroforesi acida nucleica dell'agarosi

Gli amplificatori di Tris sono ampiamente usati per l'elettroforesi dell'agarosi del DNA. I due amplificatori principali sono TBE (Tris borate/EDTA) e TAE (Tris acetate/EDTA). Sebbene ci siano alcune differenze nella risoluzione delle forme differenti di DNA e di loro mobilità durante l'elettroforesi, questi amplificatori di Tris possono essere usati generalmente scambievolmente. Gli ioni del borato in TBE inibiscono molti enzimi, così senza eseguire un certo tipo di purificazione del DNA dopo l'elettroforesi, alcune manipolazioni a valle enzima-mediate non possono lavorare. Di conseguenza, l'amplificatore di TAE è favorito per uso di ogni giorno nella maggior parte dei laboratori del DNA.

Fabbricazione dell'amplificatore di Tris

L'amplificatore di Tris è una buona scelta per la maggior parte dei sistemi biologici perché ha un pKa di circa 8,1 a 25°C, rendentegli un efficace amplificatore nell'ordine del pH 7-9. Questa gamma di pH è adatta a maggior parte dei processi biologici. La polvere di Tris è inoltre meno costosa e più robusta degli amplificatori specializzati quale HEPES.

Ci sono due modi fare una soluzione tampone di Tris. Uno è di fare le soluzioni della base di Tris e dell'HCl di Tris, sia alla concentrazione desiderata che poi aggiunge le aliquote di una soluzione (solitamente HCl di Tris) all'altra (solitamente soluzione della base di Tris) mentre controlla il pH fino ad ottenere il pH corretto. In pratica, questo è fatto molto raramente.

Il metodo di fabbricazione usuale dei la maggior parte degli amplificatori comunemente usati di Tris è di cominciare con soltanto la base di Tris. La quantità appropriata di polvere di Tris è dissolta in acqua, il pH è regolato con l'HCl e poi l'amplificatore è compensato il volume desiderato. Supponendo che c'è nessun oltrepassi mentre regolano il pH, questo metodo non cambia la forza ionica. Tuttavia, dopo oltrepassi e riadattando con il NaOH, o usando l'HCl di Tris e regolando il pH con NaOH, c'è un cambiamento nella forza ionica. Secondo l'uso progettato dell'amplificatore di Tris, un tal cambiamento può o non può essere importante.

Nel fare un amplificatore di Tris, è importante utilizzare un elettrodo Tris-compatibile quando regola il pH. gli elettrodi della Unico giunzione Ag/AgCl possono esibire l'instabilità una volta usati con gli amplificatori di Tris perché l'argento gradualmente precipita ed ostruisce l'elettrodo. L'uso degli elettrodi di riferimento del calomelano o della doppio giunzione assicura le misure accurate di pH nell'amplificatore di Tris.