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Quali condizioni deve soddisfare il reagente chimiluminescente utilizzato come etichetta?
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Nel campo della bioanalisi moderna e della diagnosi medica,L'immunoassay chimiluminescente (CLIA) è diventato un metodo di rilevamento indispensabile con i suoi numerosi vantaggi, come l'alta sensibilità e la forte specificitàEssendo l'elemento centrale di questa tecnologia, le prestazioni del reagente chimiluminescente utilizzato come etichetta determinano direttamente i risultati dei test.Parliamo delle condizioni chiave che il reagente chimiluminescente utilizzato come etichetta deve soddisfare.

 

1- Capacità di partecipare a reazioni chimiluminescenti
1) Principio di base della reazione: i reagenti chimiluminescenti devono avere le caratteristiche intrinseche di poter partecipare a reazioni chimiluminescenti,che è la radice della generazione di segnali di rilevamentoPrendiamo l'estere di acridinio come esempio. Come substrato luminescente relativamente ideale, può essere ossidato da perossido di idrogeno in un ambiente alcalino per emettere luce.Questo processo di reazione redox comporta il trasferimento di elettroni, la rottura e la formazione di legami chimici, e porta infine al rilascio di energia sotto forma di luce.come il gruppo estero attivo nell'ester di acridinio, sono siti chiave per l'avvio delle reazioni. Possono interagire specificamente con gli ossidanti per avviare il meccanismo di luminescenza.Solo con tale reattività il reagente chimiluminescente può generare segnali luminosi tempestivamente e con precisione nel sistema di immunoassay in base all'evento specifico di legame antigene-anticorpo.

 

2) Impatto sulla sensibilità di rilevamento: l'efficienza del reagente nella reazione chimiluminescente è strettamente correlata alla sensibilità.L'alta reattività significa che il processo di luminescenza può essere avviato rapidamente in presenza di una concentrazione inferiore di reagenti per produrre un'intensità luminosa rilevabile.- nella diagnosi clinica, per il rilevamento di alcuni biomarcatori, quali i marcatori tumorali e gli ormoni,sono necessari reagenti chimiluminescenti in grado di catturare con precisione i cambiamenti sottili causati dal legame antigeno-anticorpoSe il reagente chimiluminescente ha una scarsa reattività, il suo contenuto può essere rilevato da un segnale luminescente forte e stabile, anche se il contenuto target nel campione è estremamente basso.può causare una luminescenza debole o instabile, rendendo difficile per il sistema di rilevamento distinguere tra segnali e rumore di fondo, perdendo così importanti informazioni diagnostiche.

 

2. Reagenti che possono formare coniugati stabili dopo accoppiamento con antigeni o anticorpi
L'accoppiamento di reagenti chimiluminescenti con antigeni o anticorpi è un passo chiave nella costruzione di un sistema di immunoassay ed è importante formare un coniugato stabile.Questo richiede una sofisticata tecnologia di accoppiamento chimicoPer esempio, le reazioni chimiche tra gruppi attivi, come la reazione di condensazione tra gruppi amino e carbossili, la reazione di addizione tra tiolo e maleimide, ecc.,può essere utilizzato per ottenere una connessione covalente tra i dueDurante il processo di accoppiamento, le condizioni di reazione, compresa la temperatura, il valore del pH, la concentrazione del reagente, ecc.,devono essere rigorosamente controllati per garantire la selettività e l'efficienza della reazione di accoppiamento.
Dalla raccolta dei campioni, allo stoccaggio fino al rilevamento, il coniugato deve resistere alla prova di diversi fattori ambientali, come fluttuazioni di temperatura, variazioni del pH della soluzione, ecc.Se il coniugato è poco stabile, può dissociarsi a causa di lievi variazioni di temperatura durante il trasporto del campione, causando la separazione del reagente chimiluminescente dall'antigene o dall'anticorpo,che non solo ridurrà la sensibilità di rilevamento, ma può anche causare risultati falsi negativi.

 

3L'effetto quantistico elevato e la dinamica delle reazioni sono ancora mantenuti dopo l'accoppiamento.
L'effetto quantistico determina l'efficienza della generazione di fotoni del reagente chimiluminescente durante il processo di luminescenza.Il reagente dopo il collegamento deve mantenere un effetto quantistico il più elevato possibilePer alcuni campioni biologici complessi, ci sono molte sostanze interferenti, come proteine, acidi nucleici,metaboliti, ecc. Queste sostanze possono assorbire e disperdere la luce, riducendo l'intensità del segnale di rilevamento.I reagenti chimiluminescenti ad effetto quantistico possono evidenziare il segnale bersaglio in un ambiente così complesso con la loro capacità di generazione di fotoni efficiente, facilitando l'identificazione e la quantificazione da parte del sistema di rilevamento.

 

4Le proprietà fisico-chimiche dell'oggetto etichettato non devono essere modificate o modificate molto poco
La protezione dell'attività immunologica dell'oggetto etichettato è uno dei principi fondamentali dell'applicazione dei reagenti chemioluminescenti.L' attività immunologica dell' antigene è la base per il suo riconoscimento e legame con anticorpi specifici, e l' attività immunologica dell' anticorpo è correlata alla sua capacità di catturare con precisione l' antigene.Quando il reagente chimiluminescente modifica eccessivamente le proprietà fisico-chimiche dell'oggetto etichettato durante il processo di accoppiamento, come causare la distorsione della conformazione dell'antigene e la protezione del sito di legame dell'anticorpo, diminuirà l'affinità dell'antigene-anticorpo,e persino la capacità di risposta immunitaria si perderà.

Tempo del pub : 2025-01-15 11:06:37 >> lista di notizie
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